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收藏!如何正确的选择抗体

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抗体,是我们非常熟悉的一种生物试剂, 但我们对抗体的鉴定,选择又了解多少呢?

抗体即是B淋巴细胞抗原受体的可溶性形式,专门由成熟的B淋巴细胞产生。

抗体免疫球蛋白分子由2条重链和2条轻链构成,根据其结构不同,可以把小鼠和人体内的抗体分为五类亚型。抗体分子的各个链之间以二硫键相连,从而使整个分子具有一定的灵活性。分子中没有轻链的部分称为可变区或Fc段(可结晶部分);此区域是由一组固定的基因所决定,同一个种属中的所有同亚型抗体此区域是一致的。分子中既有重链又有轻链的部分称为恒定区或Fab段(抗原结合区); 此区域的极端包含识别并结合靶抗原表位的高可变位点。Fab段也是由一组固定的基因决定,但需要进一步的体细胞突变产生独特的和高特异的可变位点(图1)。

图一、抗体的分子结构

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,在同一个抗体公司,可能会有好几种,甚至好几十种;在不同的抗体公司,那就更多了。那怎样在琳琅满目的抗体中,选择自己实验需要的抗体呢?

主要考虑如下几种因素:

析自己实验应用的实验方法是哪种?

分析自己实验中标本的种属是哪种动物或人的?

分析样本中的蛋白质的结构性质。

分析抗体的标记和检测。

 

分析抗体的宿主来源种属等等。

1.分析自己实验应用的实验方法是哪种?

一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如:可以应用于WB、IHC、ICC、ELISA、FCM分析

2.分析自己实验中标本的种属是哪种动物或人的?

一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种动物或人的标本,如:可以用于rat、mouse、human、pig、goat等动物的标本的实验。

3.分析样本中的蛋白质的结构性质

了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体,至少两方面因素需要考虑

待测样本蛋白的结构域:抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来,其中的免疫原包括:全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体(如:细菌)或细胞,抗体说明书一般都有免疫原的描述,如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域,则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FCM流式检测活细胞的表面蛋白,则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。

样本的提取或处理过程:某些抗体要求样本经过某些特殊处理,例如:许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本,另一方面,某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。当选择免疫组化的抗体时,应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织,而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织,这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来。

4.抗体宿主物种的选择

一般说来,在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时,一抗宿主动物的物种选择较为重要,对于免疫组化而言,尽可能选择与样本不同种系物种的一抗,从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应,例如:检测小鼠样本蛋白,则不应选择小鼠或大鼠源的一抗,最好选兔源的一抗,则二抗则可选择偶联了检测分子(酶、荧光素、生物素等)的抗兔IgG。如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况,除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法,则抗体宿主物种的影响不大,如对不含IgG的细胞裂解物样本的western blotting检测,尽管如此,含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白,还原变性样本中含IgG,在western blot检测中则结合出现IgG分子50 and 25 kDa的重链和轻链条带。

默克品牌介绍-抗体

默克集团(Merck KGaA)创建于1668年,拥有约350年历史,总部位于德国达姆施塔特市(Darmstadt),该集团主要致力于创新型制药、生命科学以及前沿功能材料技术, 并以技术为驱动力,为患者和客户创造价值。

默克(Merck)在国内备有近500种抗体,涵盖了表观、神经、肿瘤、干细胞、信号通路等多个热门领域。默克和sigma整合后,有超过9万种的抗体。

默克抗体特色

质量更高 :抗体投诉率行业更低。

种类更全:超过9万种抗体,满足更多实验需求

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